DNA-Isolierung aus Agarosegel via Elektroelution

Es gibt bekanntermaßen diverse Techniken, um DNA aus Agarose zu isolieren. Die Auswahl der "richtigen" Methode ist und bleibt ein Stück weit auch persönliche Geschmackssache. Zu Beginn all diese Methoden steht das Ausschneiden der Ethidiumbromidgefärbten Bande aus dem Agarosegel, welche man sich im UV-Liicht eines Transilluminators wunderbar betrachten kann. Da UV-Licht die DNA zerstört, sollte die Expositionsdauer auf ein Minimum beschränkt werden. Nun gilt es, die gewünschte Bande mit Hilfe eines Skalpells auszuschneiden. Wie nun aber bekommt man die DNA aus dem Agaroseblock? Da diese Prozedur, wie bereits obig erwähnt, reine Geschmackssache ist, und um Routinearbeit im Labor nicht allzu langweilig werden zu lassen, empfielt es sich a) des öfteren die Methode zu wechseln und b) "langweilige" Methoden möglichst zu meiden. Daher folgt nun die Beschreibung der DNA-Extraktion mittels

Elektroelution: Diese Methode hat gegenüber der gebräuchlichen Säulenaufreinigung auch den Vorteil, daß sich bei sorgsamem Handling die Ausbeute deutlich erhöhen läßt. Außerdem empfiehlt sich diese Methode für längere DNA-Fragmente, bei denen Säulenaufreinigung nicht mehr so recht mitspielen mag.
Der Agaroseblock wird in ein kleines Stück Dialyseschlauch mit einer kleinen Menge frischem Elektrophoresepuffer gegeben. Die Enden werden mit Tesafilm verschlossen und der Schlauch in die Elektrophoresekammer gegeben. Die angelegte Spannung läßt die DNA aus der Agarose wandern, allerdings kann sie den Dialyseschlauch nicht verlassen. Der Vorgang läßt sich unter UV-Licht kontrollieren. Hat die DNA den Agaroseblock komplett verlassen, wird die Elektrophoresespannung kurzzeitig umgepolt, um die DNA von der Schlauchwand zu lösen. Der Schlauch wird vorsichtig geöffnet und der DNA-haltige Puffer aufpipettiert. Anschließend wird die DNA mit Ethanol präzipitiert.

H. Brumm im Januar 2003

Ich plane, diese Reihe fortzusetzen. Als nächstes folgt wahrscheinlich eine Anleitung, wie handelsübliche Grillkohle (der nächste Sommer kommt bestimmt) mit Hilfe von flüssigem Sauerstoff in 5 sec grillfertig durchgeglüht werden kann.