ES-Zell-basierte Techniken zur Herstellung transgener Mäuse inklusive der Zellkultur

Die angebotenen Leistungen der Transgenen Technologien (TT) umfassen die Elektroporation, Selektion sowie das Picken und Verschicken von maximal 480 Klonen (fünf 96-well-Platten). Nach der Genotypisierung durch den Kunden werden maximal 3 Klone in insgesamt 75 Blastozysten injiziert und diese dann in scheinträchtige Ammen transferiert. Neben den eigenen ES-Zellen können auch extern hergestellte ES-Zellklone in Blastozysten injiziert werden.
Für die Elektroporation benötigen wir 2 x 20 µg geschnittene und gereinigte DNA (siehe DNA Prep.pdf) in einer Konzentration von 2 µg/µl.

Folgende Schritte sind für die Herstellung einer ES-Zell-basierten transgenen Linie notwendig:

Arbeitsschritt	Zuständig
- Erweiterungsantrag	TT und Auftraggeber
- Vektordesign und Herstellung	Auftraggeber
- Aufreinigung des Vektors	Auftraggeber
- Elektroporation und Selektion	TT
- Genotypisierung der Klone	Auftraggeber
- Injektion der ES-Zellen	TT
- Zucht der Chimären	TT
- Verpaarung auf Keimbahngängigkeit	TT
- Genotypisierung der Nachkommen	Auftraggeber

Die Transgenen Technologien (TT) verfügen über einen laufenden Tierversuchsantrag, in dem die Generierung neuer Linien beschrieben worden ist. Zu jeder neuen Linie muss eine Stellungnahme geschrieben werden, die die Punkte 1.2.1, 1.2.2, 1.2.3, 1.3.1, 1.3.2, 1.4.2 (die Zahlen werden von den Transgenen Technologien ergänzt), 1.6.5 und 1.7.1 des „Antrags auf Genehmigung eines Versuchsvorhabens nach § 8 Abs. 1 des Tierschutzgesetzes“ (http://www.charite.de/tierschutz/genehmigung.html) beantwortet.
Dieser Antrag wird durch die Transgenen Technologien an die/den zuständige/n Tierschutzbeauftragte/n weitergegeben und durch diese/n beim LAGeSo eingereicht.
Bitte beachten Sie, dass für die weiteren Arbeiten mit den transgenen Tieren gegebenenfalls ein gesonderter Tierversuchsantrag gestellt werden muss.
Die Kosten für diesen Service entnehmen Sie bitte der aktuellen Entgeltordnung der FEM (bitte im Sekretariat der FEM anfordern: fem@charite.de).

Bei Fragen zu diesem Service wenden Sie sich bitte an den Leiter der Transgenen Technologien:

Dr. G. Michel
geert.michel@charite.de

Downloads:
TG Erstellungsantrag
Tierversuchsantrag
DNAprep.pdf
Gendokumentation

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